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聚甲醛固定后冰冻切片好切吗?
发布时间:2016-04-11 17:23

      多聚甲醛固定后的冰冻切片非常好切。而且抗原保存很完整。另外冰冻切片的冷冻问题,取出材料后用4%的多聚甲醛固定后,置于20%的蔗糖溶液中进行等渗,然后再至于30%的蔗糖溶液中进行等渗一定要等到材料沉底,随后进行包埋和切片,这样切好的片子中材料不会有冰晶造成的破坏。


 
      当然前提温度要适合,刀要磨好,材料不可切太厚。这些都是必须的步骤。但是用包埋剂是没有必要的,直接从蔗糖中取出后就开始冰冻切片,只是贴组织块时腰现在下面贴一小张湿的滤纸,然后贴上组织块,然后沾上PBS液涂于组织块周围,让其快速的冷冻即可。最后切片的厚度可自行掌握,一般在20~40微米。另外视其组织块大小得适当的调整冷冻温度,切片时应调整温度为恒定。多聚甲醛对大多数抗原的固定是没有问题的,但是不同的抗原对于固定液是有要求的,例如,有的抗原就需要用多聚甲醛和饱和苦味酸的混合液,因此做实验之前就要先查一下资料。对于常规的后固定、泡蔗糖就都是一样的。二十多年以前,病理科用二氧化碳冰冻切片,片厚在20到40微米。有了恒温箱式切片机之后,切片厚度减到7至5微米。目前大多数的冰冻免疫组化都是用这种切片。

      这种切片大都用新鲜未固定的组织。我们一般切5-10微米,可以染HE,当然结构要差点,但是大多数组织差别不大。对于先固定后冰冻的做法,一定要近蔗糖,而且一般切片保存时间不要过长,

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